MULTIPURPOSE HANDLING MEDIUM™ (MHM™)

Описание

Среда Multipurpose Handling Medium™ (MHM™) предназначена для использования во вспомогательных репродуктивных процедурах, которые включают манипуляцию гамет или эмбрионов. В частности, среда Multipurpose Handling Medium ™ (MHM ™) показана для использования в качестве среды для обработки ооцитов во время процедур аспирации фолликулов (не для промывки фолликулов), для промывки спермы до процедур оплодотворение ЭКО и ИКСИ, и для переноса эмбриона в матку во время процедуры переноса эмбриона.

Гарантия качества

• MHM ™ это среда для манипуляций, с фильтрованной оболочкой и асептически обработана в соответствии с производственными процедурами, которые были утверждены, чтоб соответствовать уровню гарантии стерильности (SAL) 10-3.

Каждый лот среды MHM™ тестируется на:

• Методологию Endotoxin by Limulus Amebocyte Lysate (LAL)
• Биологическая совместимость по Анализу мышиного эмбриона (одна клетка на ≥80% расширения бластоцист после 96 часов ).
• Стерильность по действующему тесту на стерильность (USP) <71>
• Анализ на выживание человеческой спермы (HSSA) (≥ 70% подвижности на 24 часа).
  
• Все результаты анализа указываются на определенном Сертификате анализа лота, который доступен по запросу.
  

Система буфера

• MHM™ использует систему буферов HEPES (N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этансульфоновой кислоты), MOPS (3 Morpholinopropane-1-сульфоновой кислоты) и сочетания Бикарбонат Натрия.
• Эта система буферов обеспечивает поддержание рН на физиологическом уровне (от 7,2 до 7,4) и не требует использование CO2 инкубатора.
  

Добавление белка

Среда MHM™ не содержит компоненты белка. Общая лабораторная практика включает добавление белка в использования этой среды. Количество белковой добавки может меняться в зависимости от лаборатории и зависит от фазы обработки / выращивания гамет и эмбрионов. Проконсультируйтесь с Вашими индивидуальными лабораторными протоколами.

Ниже приведены рекомендации по белковой добавке, основанные на инструкции по применению MHM™:

Для промывки спермы:

• При использовании Human Serum Albumin (HSA) от Irvine Scientific, 100 мг / мл раствора использовать на 5 мг / мл.
• Для 10 мл среды, добавить 0,5 мл раствора белка HSA на 9,5 мл среды.
• При использовании сыворотки Serum Substitute Supplement (SSS) от Irvine Scientific, белковый раствор 50мг/мл использует 10% (об/об).
• Для 10% среды, добавить 1,0 мл SSS к 9,0 мл среды.

Получение ооцитов:

• При использовании белка HSA от Irvine Scientific, 100 мг / мл раствора использовать на 5 мг / мл.
• Для 10 мл среды, добавить 0,5 мл раствора белка HSA на 9,5 мл среды.
• При использовании сыворотки Serum Substitute Supplement (SSS) от Irvine Scientific, белковый раствор 50мг/мл использует 10% (об/об).
• Для 10% среды, добавить 1,0 мл SSS к 9,0 мл среды.

Для переноса эмбриона:

• При использовании белка HSA от Irvine Scientific, 100 мг / мл раствора использовать на 30 мг / мл.
• Для 10 мл среды, добавить 3,0 мл раствора белка HSA на 7,0 мл среды.
• При использовании сыворотки Serum Substitute Supplement (SSS) от Irvine Scientific, белковый раствор 50мг/мл использует 50% (об/об).
• Для 10% среды, добавить 5,0 мл SSS к 5,0 мл среды.
  

Инструкция по применению

Ниже следующие это общие процедуры для использования MHM™.

Промывка спермы:

1. Нагреть среду до комнатной температуры или 37 ° С.
2. Позволить сперме разжижаться при комнатной температуре в течение 20 до 30 минут.
3. Используя асептические методы, перенесите сжиженную сперму в стерильную 10 мл коническую пробирку для центрифуги, добавьте 2 к 3 объема MHM™ комнатной температуры (для примера, 2 мл спермы требует от 4 до 6 мл среды). Объем смеси среды для спермы должен быть больше 5 мл. Разделить на две стерильные конические пробирки для центрифуги, минимизируйте объем на пробирку 4 - 6 мл, восстановление спермы будет максимальным, извлечение спермы будет максимальным. Образцы, имеющие высокую вязкость, могут потребовать дальнейшей обработки, чтобы обеспечить полное восстановление спермы. (См. раздел специальных соображении обработки).
4. Пробирки комнатной температуры поместить в центрифугу на 10 минут, используя силу в 200-300 хG.
5. Используя стерильную пипетку, снимите и удалите супернатант над "гранулы спермы" применяя аспирацию. Сперма потом должна быть ресуспендирована, осторожно стряхивая пробирку снаружи при помощи указательного пальца. (Примечание: Не используйте вихревой смеситель для данного этапа). Ресуспендируйте сперму в 1 до 2 мл свежей среды, резюмируйте и аккуратно перемешайте, инверсируя образцы, которые были фракционированы для первого этапа центрифугирования. Образцы должны быть теперь объединены в одной пробирке.
6. Повторить центрифугу как в этапе 4.
7. Используя стерильную пипетку, снимите и выбросьте супернатант и осторожно приостановите осадок спермы, взбалтывая вручную. Добавить свежую среду до конечного объема в 0,5 мл. Сперма готова к вспомогательным репродуктивным процедурам. (Примечание: Общий объем небеременной матки 0,25 - 0,50 мл).
   

Специальная обработка отходов

• Переработка образца очень вязкой спермы:

Некоторые образцы, естественно, очень вязкие, даже после разжижения. Эти образцы имеют консистенцию тяжелого сиропа, и могут быть одними из наиболее трудно перерабатываемых.

1. После того как среда добавлена эякуляту, осторожно удалите и выбросите смесь используя иглу 18 калибра и шприц. Это "выстрижет" некоторое кол-во вязкой слизистой.
2. Ограничьте среднее кол-во смеси среды и спермы с этапа 1, до 5 мл на пробирку для центрифугирования для первого этапа центрифугирования.
3. Если после предварительной обработки образца с иглой и Шприцом (Этап 1), сперма в обычном порядке не "осаждается" (сперма будет выглядеть как "облачное волокно” прикрепленное к нижней части пробирки центрифуги), тщательно удалите, как можно большую часть супернатанта, не нарушая "облачное волокно спермы", используя стерильную иглу и шприц.
   Это может быть сделано путем плотного держания скошенного края иглы, к стенке пробирки центрифуги. Медленно начните аспирацию от верхней части пробирки вниз. Когда будет удаленно такое кол-во супернатанта, насколько было возможно, добавьте 2 или 3 мл свежей среды. Повторите процесс, используя иглу 18 размера и шприца. Повторите центрифугу смеси. Сперма должна осаждаться нормально после второй обработки.
4. На последующих сборах образцов, пациенту должно быть предложено, произвести разделение эякулята, который сведет к минимуму вязкости в большей части образца спермы.

• Извлечение ооцитов (не для промывки фолликул яичника):

Среда MHM ™ может быть дополнена проверенным, на качество фармацевтического, класса гепарином (2,5 - 10 единиц / мл), чтобы уменьшить свертывания фолликулярной аспирации, содержащей кровь.

1. Приведите среду с белковой добавкой до комнатной температуры или до 37 ° С.
2. Собранные фолликулярные аспираты должны быть перенесены в пустые стерильные блюдца.
3. . Распознать ооциты и удалить их из фолликулярной жидкости и возможных, загрязнение кровью с помощью стерильной пипетки, с использованием предварительно промытой и дополненной средой MHM ™.
4. Сполосните ооциты в разогретой и дополненной белком среде MHM ™.
5. Поместите ооциты в уравновешенную среду для культивирования для дальнейшей манипуляции.

• Перенос эмбриона:

Перенос эмбрионов из среды для культивирования на 3 или 5 день:

1. На 3-й день или 5-ый день после оценки эмбрионов для развития, довезти среду с добавленным белком, до комнатной температуры или до 37 ° С.
2. Установите стерильную чашку для промывки, содержащую предварительно нагретою и добавленным белком среду MHM ™ по одной для каждого набора эмбрионов.
3. Разместите 1,0 мл подогретой среды MHM ™ с добавленным белком, в лунке стерильной чашке с 1 лункой.
4. Поместите чашку для промывки на этап нагревания.
5. Промойте эмбрионы в чашке для промывки, 2-3 раза подбирая эмбрионы и перемещая их вокруг в лунке, в минимальном объеме подогретой среды MHM ™ с добавленным белком.
6. После промывки, эмбрионы готовы для переноса пациенту.
   Для получения дополнительной информации по использованию среды MHM™, каждая лаборатория должна следовать своим лабораторным процедурам и протоколам, которые были специально разработаны и оптимизированы для Вашей индивидуальной медицинской программы.

Меры предосторожности

• Это изделие предназначено для использования обученным персоналом в сфере репродуктивных процедурах. Эти процедуры включают указанное применение, для которого это изделие предназначено.
• Это изделие не предназначено для использования в процедурах промывки фолликул яичника и ооцитов. Не используйте флакон со средой, в которой присутствуют следы твердых частиц или облачности.
  
• Среда Multipurpose Handling Medium™ (MHM™) должна быть жестко прикрыта при использовании в CO2 инкубаторе, чтобы избежать уровня рН 7,0 или менее.
  
• Чтобы избежать проблем с загрязнением, храните с использованием асептических методов и утилизируйте излишки среды, которые остаются во флаконе или пробирке после завершения процедуры.
  
• MHM ™ содержит антибиотик: Сульфат Гентамицина. Должны быть приняты соответствующие меры предосторожности, чтобы убедится, что пациент не чувствителен к этому антибиотику.
  

 

Код продукта	Наименование	Назначение	Объем
90163	Multipurpose Handling Medium™ (MHM™)	Вспомогательные репродуктивные процедуры	100 мл, 500 мл

Назад в раздел